Bilirrubina em pó CAS 635-65-4é extraído principalmente da bile. A bilirrubina é insolúvel em água, solúvel em solventes orgânicos como benzeno, clorofórmio e dissulfeto de carbono e ligeiramente solúvel em etanol e éter. A bilirrubina também pode ser dissolvida em uma mistura quente de etanol e clorofórmio. O sal de sódio da bilirrubina é facilmente solúvel em água, mas seus sais de cálcio, magnésio e bário são insolúveis em água. A bilirrubina é um cristal monoclínico de cor laranja claro ou marrom avermelhado profundo. Seu sólido seco é relativamente estável e a solução de clorofórmio também é relativamente estável no escuro. É instável em solução alcalina (como 0,1mmol/L de hidróxido de sódio) ou quando encontra íons de ferro trivalentes e é rapidamente oxidado em biliverdina. A bilirrubina pode se ligar à glicina, alanina ou histidina. A adição de proteínas séricas, vitaminas ou EDTA pode estabilizar a bilirrubina.
1. Preparação de sal de cálcio pelo método de extração indireta de sal de cálcio: adicione 3-3,5 vezes de sobrenadante de água de cal saturada em bile de porco fresca sob agitação e, em seguida, continue a agitar por 5-10min, Ph{ {4}}, retirar a espuma quando aquecida a 50 graus com gaze, continuar aquecendo até ferver, manter por 2min, esfriar, filtrar e obter sal de cálcio. Preparação do produto acabado de bilirrubina: Pegue sal de cálcio e adicione 0,8 vezes a quantidade de água para fazer uma pasta, peneire em 30-40 malha, adicione 0,3% de antioxidante ao filtrado, adicione sal e ácido para ajustar o pH para 1,5, deixe repousar por 4 horas, filtre, adicione 8-10 vezes a quantidade de etanol 80% à torta de filtro, amasse e misture bem, adicione antioxidante, deixe repousar durante a noite e obter o precipitado. Adicione 4-6 vezes a quantidade de 80% ou mais de etanol e antioxidante, mexa e deixe de molho durante a noite. Repita este processo 3-4 vezes e seque o precipitado abaixo de 70 graus para obter o produto final de bilirrubina.
Precipitação de sal de cálcio [HCl, sulfito de sódio pesado] → precipitação [etanol, sulfito de sódio pesado] → precipitação [70 graus] → produto de bilirrubina.
2.Preparação de bilirrubinato de cálcio pelo método de extração com clorofórmio: A bile fresca de porco é ajustada para pH 12 com hidróxido de sódio, aquecida até a ebulição, é adicionada uma solução de cloreto de cálcio, depois aquecida até a ebulição, resfriada e filtrada para obter bilirrubinato de cálcio. Bílis de porco [NaOH, CaCl2] → [pH 12, 100 graus] Preparação de pó de bilirrubina CAS 635-65-4 produto acabado de bilirrubina de sal de cálcio: o sal de cálcio de bilirrubina é ajustado para pH 1-2 com ácido clorídrico 1:1, a água ácida é drenada, o clorofórmio é extraído com clorofórmio, lavado com etanol anidro e a solução é deixada a cerca de 5 graus para obter o produto acabado de bilirrubina.
Sal de cálcio de bilirrubina [HCl] → [pH1-2] composto ácido [clorofórmio, etanol anidro] → [5 graus] produto acabado de bilirrubina
3. Método aprimorado de sal de cálcio para acidificação de sal de cálcio: pegue bílis de porco fresca e adicione hidróxido de cálcio a 1%, mexa bem, aqueça rapidamente até 90-97 grau, mantenha aquecido por 10 minutos e filtre para obter sal de cálcio. O aquecimento a 40 graus causará o aparecimento de gordura, que pode ser removida com cuidado. O sal de cálcio obtido pode ser lavado uma vez com água quente para remover o excesso de álcalis e outras impurezas. Pegue o sal de cálcio e adicione mais de 10 vezes a quantidade de água para dispersá-lo uniformemente. Adicione 1% de antioxidante e mexa (60 r/min) para adicionar ácido clorídrico 1:2 gota a gota. Dentro de 40 minutos, atinja o pH 2,0 e espere até que o pH permaneça inalterado para obter uma substância ácida. Bílis de porco [hidróxido de cálcio a 1%] → [90-97 grau, 15min] Sal de cálcio biliar [antioxidante, ácido clorídrico] → [pH2,40min] Lavagem com álcool ácido ácido, lavagem com água: A bilirrubina acidificada é dispersa uniformemente à temperatura ambiente com 10 vezes a quantidade de etanol, o pH não deve ser superior a 5, adiciona-se 0,5% de antioxidante, agita-se e deixa-se cerca de 1 hora para estratificação. Vá para a camada superior da solução alcoólica e colete a bilirrubina precipitada. Lave a bilirrubina com água morna a 50 graus por cerca de 5 minutos, colete a bilirrubina flutuante, adicione rapidamente etanol para desidratação e remova o etanol para obter bilirrubina bruta. Composto ácido [etanol] → [1h] precipitar bilirrubina [água quente a 50 graus] → [etanol] extração, evaporação, cristalização e secagem de bilirrubina bruta: Pegue a bilirrubina bruta e adicione 10 vezes clorofórmio para agitar a 50 graus por 10 minutos. Se necessário, extraia 2-3 vezes e o resíduo deverá ficar branco. O extrato de clorofórmio foi submetido à destilação a vácuo até quase seco, resultando na formação da maioria dos cristais de bilirrubina. Após arrefecimento até à temperatura ambiente, adicionou-se etanol e arrefeceu-se ainda a 4 graus durante 10 minutos. Os cristais de bilirrubina foram filtrados e tratados com etanol anidro ou éter, seguido de secagem a vácuo para obtenção de bilirrubina de alta qualidade.
Bilirrubina bruta [clorofórmio] → [10min] solução de clorofórmio [cristalização] → bilirrubina de alta qualidade
4.Preparação da solução de hidrólise pelo método de extração de resina de troca iônica: Pegue a bile de vaca fresca, filtre com gaze, adicione solução de hidróxido de sódio 2mol / L para ajustar o pH para 10 enquanto mexe, ferva e filtre para obter o hidrolisado.
Adsorção e eluição de ácido biliar por coluna de resina de solução de hidrólise: Despeje a solução de hidrólise fervida na coluna de resina pré-aquecida até que a cor do efluente fique mais escura e a adsorção fique saturada.
Adicione água fria até que a temperatura dentro da coluna caia para a temperatura ambiente e, em seguida, adicione solução diluída de cloridrato de bissulfito de sódio do topo da coluna para tornar o pH do efluente 1.
Lavar com etanol a 75%, coletar quando o eluente for uma solução turva verde escura e lavar até que o efluente fique límpido e o pH esteja próximo do neutro. Lave novamente com etanol 95%.
Colete a solução de eluição de etanol para a preparação de ácido biliar. Solução de hidrólise [coluna de troca iônica] → [etanol 75%, etanol 95%] Eluente de etanol para eluição, concentração e secagem de bilirrubina: Libere todo o etanol 95% da coluna, mergulhe em clorofórmio por 10 minutos e colete o eluente de clorofórmio até não aparece a cor amarela.
Destilar o eluente clorofórmio até quase à secura, adicionar etanol anidro e continuar a recuperar até que não haja clorofórmio. Filtre enquanto estiver quente, colete a bilirrubina, seque e obtenha o produto final de bilirrubina.
Yolanda
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